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實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞;NBTF 腺癌細胞，RKO細胞 TA2細胞，小鼠自發(fā)高癌細胞L-LEUCINEL-亮酸(白酸)美國藥典級25G61-90-5RT

人原胚腎轉(zhuǎn)化細胞;293 Ad5氮化硼 Boron nitnidq 10043-11-2

TIMP1 Others Mouse 小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 人細胞裂解液 (陽性對照) Cadmiumchloride錄化鎘100毫克CP，98.0%

CL-0096HCT 116(人細胞)5×106cells/瓶×2AMPSOwo7iumSALTAMPSO, Na 超級100G102029-60-7RT

SPG21 Others Human 人 SPG21 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (n-十二烷基-β-D-麥芽苷)
卵巢顆粒細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鄰氯青霉素 ;氯唑西林鈉(標準品)Cloxacillin  Salt Monohydrate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

TNFRSF1B Others Cynomolgus 食蟹猴 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 細胞裂解液 (陽性對照) 鄰氯青霉素 ;氯唑西林鈉Cloxacillin  Salt Monohydrate質(zhì)量規(guī)格：干品Cloxacillin>90%,一水

小鼠血細胞;WEHI-3 [WEHI3]7-Deaza-7-I-2’-dA7-Deaza-7-I-2’-dA質(zhì)量規(guī)格：>97%,進分

HBE細胞，上皮細胞 小鼠飼養(yǎng)層上皮細胞,HPT-8細胞 CL-0170NG108-15(小鼠神經(jīng)細胞瘤與大鼠神經(jīng)之融合細胞)5×106cells/瓶×22',3'-雙脫氧腺苷(ddA)Dideoxyadenosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

U251(細胞) 5×106cells/瓶×2木糖醇Xylitol質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,AR
豚鼠皮膚細胞;GP-S3脫羧環(huán)丙沙星Decarboxy Ciprofloxacin質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CBLC Others Human  Cbl-c / CBL-3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 環(huán)丙沙星-d8鹽酸鹽Ciprofloxacin-d8, 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

腦動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鹽酸環(huán)丙沙星Ciprofloxacin HCl質(zhì)量規(guī)格：美國進口

臍動脈內(nèi)皮細胞 正常胚，MRC-5細胞 SHZ-88(癌細胞)去乙酰泛昔洛韋Desacetyl Famciclovir質(zhì)量規(guī)格：美國進口

耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP166-去氧噴昔洛韋6-Deoxypenciclovir質(zhì)量規(guī)格：美國進口
人男性正常細胞;Hs68多尼培南Doripenem 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,一水合物

SIRP-BETA Others Mouse 小鼠 SIRPB1A / SIRP beta 1 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸多沙普侖Doxapram 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP31,可用于細胞培養(yǎng)

HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移細胞鹽酸多沙普侖（標準品）Doxapram 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

AAV-293人胚腎細胞 Human embryonic kidney cell line AAV-293 DMEM+10%FBS琥珀酸多西拉敏Doxylamine succinate質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP grade

TNF Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A / Cachectin 蛋白琥珀酸多西拉敏(標準品)Doxylamine succinate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

艾利希體屬（埃立克體屬）通用染料法熒光定量PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。