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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號(hào) | BK-P64654 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
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人病毒8型染料法熒光定量PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64654 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
3T3-Swiss albino細(xì)胞，胚胎成纖維細(xì)胞 人*癌細(xì)胞,CRL細(xì)胞 CM-M048小鼠腸巨噬細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL活性腸肽質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRVasoactive Intestinal peptide
大鼠肝細(xì)胞瘤;H-4-II-EZ-Ala-Ala-Leu-pNA質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRZ-Ala-Ala-Leu-pNA
IL1R1 Others Human 人 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 三亞甲基碳酸酯質(zhì)量規(guī)格： 度≥99%TMC
內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)碳酸錳(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRManganese (II) carbonate
CDON Others Human 人 CDON / CDO 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 硝酸鈀質(zhì)量規(guī)格：BRPalladium (II) nitrate dihydrate
食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)天青II曙紅質(zhì)量規(guī)格：BSAzure II eosinate
AL7P/HL-60R細(xì)胞，原髓細(xì)胞細(xì)胞 615小鼠T細(xì)胞性瘤株,L7712細(xì)胞 孔雀綠1酸鹽檢測(cè)試劑盒MGmP菲律賓菌素;非律平;Filipin質(zhì)量規(guī)格：sigma分裝Filipin complex from Streptomyces filipinensis
NCI-H520(肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2天青I;天青B質(zhì)量規(guī)格：BSAzure I
C4-2(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 T-111B木瓜蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T]天青II質(zhì)量規(guī)格：BSAzure II
白鰱尾鰭細(xì)胞系;SCF天青A質(zhì)量規(guī)格：BSAzure A chloride
胎兒細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL卡拉膠Carrageenan質(zhì)量規(guī)格：粘度≥0.005 pa.s
MDCK細(xì)胞，狗腎細(xì)胞 AAV-293( 胚腎細(xì)胞) 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B5普侖司特Pranlukast質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR
EFNB2A Protein Danio rerio (zebrafish) 重組斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)1酸美托洛爾Metoprolol tartrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
WI-38(胚肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠癌細(xì)胞;CCC-Ca761-031酸美托洛爾（標(biāo)準(zhǔn)品）Metoprolol tartrate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-懸浮生長裂解物HOPC-os
L阿拉伯膠Arabic gum質(zhì)量規(guī)格：>99%,醫(yī)藥級(jí)
PVR Others Mouse 小鼠 CD155 / PVR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) wo7iumDODECYLSULFATE十二烷基鈉蛋白組學(xué)級(jí)白色至米白色精細(xì)粉末RTsigma
人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17亮綠瓊脂 BRILLIcNT GRqqN cGcR MODIFIqD FOR
DDR2 Others Human 人 DDR2 Kinase / CD167b (aa 422-855) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (III) Sudan III (certified by the Biological... 85-86-9 5G 染色劑
CL-0355HFT-8810(人胎兒胸腺細(xì)胞株)5×106cells/瓶×2檸檬酸鐵shēng huà shì jì容量：5克
CHO, 中國倉鼠卵巢細(xì)胞系 人T細(xì)胞瘤，Jurkat E6-1細(xì)胞 THLE-3(人肝上皮細(xì)胞)ProtaminSulfate 1g/5g/25g/100g 原裝 Sigma P4380
人病毒8型染料法熒光定量PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
