產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4478 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
須毛癬菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 | Trichophyton mentagrophytesPCR | BKP4478 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:須毛癬菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Benzimidazole 51-17-2 中文名:苯并咪唑 分子式:C7H6N2 骨橋蛋白 ( Osteopoin) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 德國(guó) IBL
Benzoin oxime 441-38-3 中文名:安息香肟 分子式:C14H13NO2 OX-40 ELISA Kit 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 奧地利 Bender
Benzopinacol 464-72-2 中文名:苯頻哪醇 分子式:C26H22O2 Human sP53 Kit 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 法國(guó) Diaclone
5-Benzimidazolecarboxylic acid 15788-16-6 中文名:5-苯并咪唑甲酸 分子式:C8H6N2O2 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素 3(-3) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
m-Anisic acid 586-38-9 中文名:間茴香酸 分子式:C8H8O3 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素 4(-4) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)Elisa試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Amiodarone 19774-82-4 中文名:鹽酸胺酮 分子式:C25H30ClI2NO3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ElisaKit ELISA. 96T/48T Alogliptin benzoate 850649-62-6 中文名:阿格列汀苯甲酸鹽 分子式:C25H27N5O4
豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽elisa試劑盒 豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽試劑盒、豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Amiodarone 中文名:鹽酸胺酮 分子式:C25H30ClI2NO3
豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Amiodarone 19774-82-4 中文名:鹽酸胺酮 分子式:C25H30ClI2NO3
豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISAKit ELISA. 96T/48T Amlodipine 中文名:氨氯地平 分子式:C20H25ClN2O5 度:98.0%
須毛癬菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3A分子篩(20-40目,氣相、液相色譜柱專用)質(zhì)量規(guī)格:20-40目,氣相、液相色譜柱專用Molecular sieves, 3 ?
人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HRGECL3A分子篩(40-60目,氣相、液相色譜柱專用)質(zhì)量規(guī)格:40-60目,氣相、液相色譜柱專用Molecular sieves, 3 ?
A2780細(xì)胞,人細(xì)胞 鮭魚胚胎細(xì)胞,CHSE細(xì)胞 腦微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)3A分子篩(60-80目,氣相、液相色譜柱專用)質(zhì)量規(guī)格:60-80目,氣相、液相色譜柱專用Molecular sieves, 3 ?
BNL 1ME A.7R.1(小鼠肝上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23A分子篩(80-100目,氣相、液相色譜柱專用)質(zhì)量規(guī)格:80-100目,氣相、液相色譜柱專用Molecular sieves, 3 ?
HAoSMC Pellet 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人無(wú)色素睫狀上皮細(xì)胞裂解物HNPCEpiCL1,6-二1酸果糖三鈉鹽(98-101.0%,BR)質(zhì)量規(guī)格:98-101.0%,BRFructose 1,6-bisphosphate, 3 salt
HFL1 人錄化芐基三乙,英文名或英文縮寫:TEBAC,級(jí)別:CP,45.5%,規(guī)格:100毫克
CM-R043大鼠小腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL米諾地爾 Minoxidil,≥99% 38304-91-5 5G 通用試劑
U251人細(xì)胞草醋;二醋 litxium oxclctq 223-91-3
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;HH-29 人腦膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL腺苷脫酶測(cè)試盒shēng huà shì jì容量:RT200支/包
人上皮細(xì)胞;MCF-10APH緩沖液 PH1.0(20℃)NA
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。